miércoles, 6 de junio de 2012

TAREA U9 LAS BACTERIAS DE DIFERENTES ESPECIES PUEDEN COMPARTIR PLASMIDOS POR TRANSFORMACIÓN?


SI
La transformación es la transferencia genética que resulta de la incorporación de DNA desnudo por una célula receptora desde una célula donadora. Ciertas bacterias (ej. Bacillus, Haemophilus, Neisseria, Pneumococcus) son capaces de tomar DNA del medio ambiente y ese DNA que es introducido puede llegar a ser incorporado al cromosoma de la célula bacteriana receptora. Esto se llama transformación natural. Porqué si puede ser transferido ADN entre bacterias de especies diferentes?. Porqué lo que se requiere para que se lleve correctamente la transferencia por transformación es que exista homología entre el ADN de la bacteria donante y el ADN  de la bacteria receptora, esto para que se pueda llevar la recombinación adecuadamente.

 Es decir, cualquier porción del genoma de la célula donante puede incorporarse, siempre y cuando sea igual o similar a la de la célula receptora. El DNA de la célula donante para que pueda ser incorporado al cromosoma de la célula receptora y no tenga ningún problema para ser incorporado debe tener las siguientes características: debe ser de doble hélice, similar al DNA de la célula receptora, porque el ADN  de la bacteria donadora que entra a la bacteria receptora, se pega en la región que exista mayor homología entre las bases, esto para que se lleve a cabo la recombinación del ADN, debe tener bajo peso molecular y  tamaño pequeño.

Con estas características la bacteria que las presente, puede ser donadora para otras, sin necesidad de pertenecer a la misma especie. Pueden ser de diferentes especies o cercanas. Con estas recombinaciones se ha logrado que numerosas bacterias sean inmunes a diferentes antibióticos y como consecuencia se hacen más fuertes y logran transmitir esas características a sus descendientes, cuando se dividen

Este tipo de bacterias Gram-positivas, se hacen competentes rápidamente durante la fase exponencial de crecimiento, esta conversión de células no competentes a células competentes está determinado por una proteína pequeña llamada factor de competencia, que es producida de forma constante y liberada o excretada al medio externo por las células de Streptococcus  pneumoniae.  Pero solo se desarrolla la competencia cuando la densidad de la población bacteriana es muy alta, ya que se necesita un elevado  valor crítico del factor de competencia. Para ello se sintetizan un conjunto de doce proteínas, que realizan el proceso de trasformación. Con estas proteínas las células competentes pueden absorber DNA de doble cadena en diferentes sitios de su superficie externa, para posteriormente cortarlo en fragmentos más cortos, gracias a la acción de enzimas.  Luego una de las cadenas es digerida por nucleasas y la otra penetra a la célula. Cabe mencionar que estos dos pasos anteriores se llevaron a cabo en el espacio periplasmático.  Al entrar el DNA al citoplasma de la bacteria se une al DNA cromosómico de la bacteria. 

La integración del DNA homologo tiene lugar mediante un proceso de sustitución de la cadena formando como producto intermedio una región heterodúplex. Las dos cadenas que forman el heterodúplex pueden no ser idénticas, en cuyo caso habrá regiones en las que el heterodúplex no se mantendrá unido mediante puentes de hidrogeno. La existencia de tales de tales regiones puede desencadenar la operación de reparación del DNA de la célula receptora, cuya activación hace que a veces se eliminen regiones mal emparejadas del exogenote y que sean reemplazadas por bases complementarias del endogenote. Este proceso es denominado corrección.

Tarea U8----- CONTROL GENETICO DEL GEN BRCA!


En 1994, los científicos descubrieron otro gen (similar al BRCA1) al que denominaron BRCA2.

En la población en general, se estima que uno de cada 800 individuos presenta una mutación en los genes BRCA1 o BRCA2. Por el contrario, uno de cada 40 individuos de origen ashkenazita presenta una de las mutaciones recurrentes. Esta mayor incidencia tiene consecuencias en cuanto a la evaluación de la trascendencia de antecedentes familiares de cáncer del seno y de ovario en personas de origen ashkenazita versus personas que no son de origen ashkenazita.


Pertenece a la familia de los genes supresores de tumores, que en el organismo sano controlan la proliferación celular.

Ellos, por tanto son reguladores negativos de crecimiento y cuando no están presentes en la célula o se encuentran inactivos a causa de mutaciones, las células dejan de crecer normalmente y adquieren propiedades proliferativas anormales, características de las células tumorales.

Estos genes que son ubicuos, porque se expresan en todas las células del organismo y participan en la reparación del ADN.Los estudios del gen BRCA2 han puesto en evidencia que es el responsable del 35% de los cánceres de mama hereditarios en mujeres y de un 14% del cáncer de mama en varones. Se han descrito unas 450 mutaciones

Las mutaciones de BRCA2 se hallan asociadas a un riesgo incrementado para el desarrollo de diversos cánceres, como el de mama femenino y masculino, el de ovario, de próstata, de páncreas y de laringe.


 BRCA2 se halla ubicado en el brazo largo del cromosoma 13 (13q 12-13). Al igual que BRCA1, el producto génico de BRCA2 está involucrado en el proceso de reparación del ADN, formando un complejo multiproteico con otras proteínas como la Rad. 51, BARD1 y BRCA1.

La mayoría de las personas que presenta una mutación en el gen BRCA1 o BRCA2 tiene una mutación única: una que es específica para ellos y para su familia. Hasta el presente, se han identificado cientos de mutaciones únicas en ambos genes BRCA1 y BRCA2.

No obstante, existen unas pocas excepciones. Por ejemplo, en individuos de ascendencia judía ashkenazita y personas provenientes de los Países Bajos, Islandia y Suecia se encontraron mutaciones específicas recurrentes. Las mutaciones vuelven a aparecer en estos grupos a causa del efecto del fundador. “Fundadores” son un pequeño grupo de personas que, debido a un aislamiento geográfico o religioso, se reproducen entre sí.

Cuando un pequeño grupo de personas se reproduce entre sí a través de las generaciones, pueden recurrir mutaciones específicas poco comunes y volverse más frecuentes en la población.

Se llama efecto del fundador.La población judía ashkenazita actual surgió de un pequeño grupo de fundadores, uno o más de los cuales debe haber portado mutaciones específicas en los genes BRCA1 y BRCA2. En especial, existen tres mutaciones (dos en el gen BRCA1 y una en el BRCA2) que representan la mayoría de las mutaciones de BRCA vistas en las personas de ascendencia judía ashkenazita. Cuando se trata de pruebas genéticas esta información tiene un significado práctico ya que algunos laboratorios ahora ofrecen paneles de mutación “étnico-específicos”.

En algunos casos, en lugar de investigar el gen entero cada vez que se realiza una prueba a una persona, los laboratorios pueden buscar primero mutaciones específicas basadas en el origen étnico de la persona. Además, el efecto del fundador es importante en los individuos judíos ashkenazitas porque ha llevado a una mayor incidencia de mutaciones BRCA en esta población.



BIBLIOGRAFIA

http://www.neurologia.com/sec/RSS/noticias.php?idNoticia=146

http://bvs.sld.cu/revistas/onc/vol17_1_01/onc12101.htm

http://mural.uv.es/aruizher/5.html

http://nyp.org/espanol/library/gyneonc/herbrov.html


Conclusión

PUEDO CONCLUIR QUE:

La transformación es la transferencia genética que resulta de la incorporación de DNA desnudo por una célula receptora desde una célula donadora. Ciertas bacterias (ej. Bacillus, Haemophilus, Neisseria, Pneumococcus) son capaces de tomar DNA del medio ambiente y ese DNA que es introducido puede llegar a ser incorporado al cromosoma de la célula bacteriana receptora

Puedo decir que se aprendieron las diferentes formas de la transferencia del material genético entre bacterias, como; la transformación, que es cuando una bacteria agarra fragmentos de ADN desnudo de otra bacteria del medio donde se encuentra y lo hace suyo, es decir, lo hace parte de su cromosoma por recombinación. Y el ADN es de cadena doble y cuando entra al interior de la bacteria receptora una cadena se degrada y solo una logra unirse al cromosoma de la bacteria. Otra es la transducción, que es cuando una bacteria donadora le transfiere su material genético a otra bacteria llamada receptora por medio de un bacteriófago, este lleva en su capside el ADN procedente de la bacteria donadora hacia la bacteria receptora, y a esta el bacteriófago inyecta el ADN que trae de la bacteria donadora y así se da el proceso de transducción. Otra es la conjugación, aquí la transferencia del material genético se da entre dos bacterias por contacto físico, una llamada donadora y otra receptora, donde una se llama f+ y la otra f-, la f+ le transfiere el material genético a la f- por medio de un Pili o puente de conjugación, son fragmentos de ADN que le transfiere y las bacterias que poseen esta capacidad son especiales, porque no todas poseen la capacidad de transferir su material genético a otra bacteria y no se pueden intercambiar el ADN entre las f+ solo a las f

9.2 Mecanismos de transferencia artificial

9.2.1 FÍSICOS

MICROINYECCION

Las micro agujas miden alrededor de 10 micrómetros. Pueden contener cerca de 15 micro litros de ADN. Es similar a la sección transversal de un cabello humano. Es un método muy preciso de transferencia génica. Requiere personal capacitado.

Los científicos pueden crear simples organismos transgénicos inyectando genes dentro de los testículos de nematodos en el punto en que las células que se convertirán en su esperma están bajo el proceso de meiosis.
La micro inyección es usada como un vector en la producción de plantas transgénicas.
La micro inyección de genes dentro de óvulos fertilizados es un vector comúnmente utilizado en la producción de animales transgénicos.



La micro inyección es un proceso que consiste en utilizar micro agujas para insertar sustancias a un nivel microscópico o en el límite de lo macroscópico dentro de una célula viva. Es un simple proceso mecánico en el cual una aguja extremadamente fina penetra la membrana celular y a veces la membrana nuclear para lanzar su contenido. La micro inyección es normalmente realizada bajo un microscopio óptico llamado micro manipulador. El proceso es frecuentemente usado como un vector en ingeniería genética y transgenética para insertar material genético en una célula. El proceso de clonación también involucra micro inyecciones.



ELECTROPORACION:

La electroporación o electro permeabilización es un significativo aumento de la conductividad eléctrica y la permeabilidad de la membrana plasmática celular causado por un campo eléctrico aplicado externamente. Es habitual en biología molecular como forma de introducción de diferentes sustancias en células, como por ejemplo sondas moleculares, un fármaco que puede cambiar las funciones celulares o un fragmento de DNA codificante, como puede ser un plásmido.


Cuando el voltaje que atraviesa una membrana plasmática excede su rigidez dieléctrica se forman poros. Si la fuerza del campo eléctrico aplicado o la duración de la exposición al mismo se eligen apropiadamente, los poros formados por el pulso eléctrico se sellan tras un corto período, durante el cual los compuestos extracelulares tienen la oportunidad de entrar a la célula. Sin embargo, una exposición excesiva de células vivas a campos eléctricos puede causar apoptosis o necrosis, procesos que provocan la muerte celular.

En biología molecular, el proceso de electroporación es usado habitualmente para la transformación de bacterias, levaduras y protoplastos vegetales. Además de membranas lipídicas, las bacterias también tienen una pared celular compuestas de peptidoglicano y sus derivados. Sin embargo, las paredes son porosas por naturaleza y sólo actúan como corazas que protegen a la célula de impactos ambientales severos. Si bacterias y plásmidos se mezclan los plásmidos pueden transferirse al interior de las células tras la electroporación. En este proceso suelen emplearse varios cientos de voltios, que atraviesan una distancia de varios milímetros. A continuación, las células han de ser manipuladas cuidadosamente hasta que tienen la oportunidad de dividirse, produciendo nuevas células que contendrán copias del plásmido. Este proceso es aproximadamente diez veces más efectivo que la transformación por métodos químicos.

Este procedimiento es también altamente eficiente para la introducción de genes externos en células en cultivo, especialmente en las de mamífero. Por ejemplo, se usa en el proceso de producción de ratones knockout, así como en el tratamiento de tumores, terapia génica y terapias basadas en células. El proceso de introducir ácidos nucleicos externos en células eucariotas se conoce comotransfección.
BIOBALISTICA:
El término biobalística deriva de la conjunción de “biología y balística” o “balística biológica”. Este es un método muy original ideado y refinado en la década de 1980 por un grupo de investigadores de la Universidad de Cornell (EE.UU.), que permite introducir ADN a virtualmente cualquier tipo de célula. En este procedimiento el ADN es introducido en las células por medio de partículas microscópicas (macropartículas) aceleradas a velocidades supersónicas, que atraviesan la pared y la membrana celular. Las partículas son aproximadamente esféricas (de 0.4 a 2.0 micrómetros de diámetro), están hechas de materiales densos como oro o tungsteno (ver microfotografía 1 y 2, respectivamente), y se recubren con el ADN que se desea transferir a las plantas. Para que las macropartículas pueda atravesar las membranas celulares y llegar al núcleo de las células blanco, son impulsadas a gran velocidad por explosión de pólvora seca, liberación de gas comprimido a alta presión (aire, helio, CO2 o N2), o por una descarga eléctrica de una gota de agua. Una vez dentro del tejido vegetal el ADN se desprende de las macropartículas debido a las modificaciones del entorno iónico.
Si las partículas atraviesan las membranas y son atrapadas en el núcleo, el ADN puede integrarse de forma estable en los cromosomas mediante un proceso de recombinación al azar, lo que se considera como transformación estable. La transformación estable ocurre a muy baja frecuencia, por lo que es necesario utilizar un sistema de selección in vitro (ver cuadernos Nº 5, 18 y 67) que permita distinguir células transformadas y no transformadas.
En este método de transformación las construcciones genéticas son más simples e incluyen los genes de interés y de selección con sus secuencias regulatorias respectivas. El ADN para ser clonado es incluido en plásmidos que son transferidos completos durante el bombardeo a las células, o bien de forma de molécula lineal (el plásmido cortado en un punto), a diferencia de los plásmidos utilizados con Agrobacterium (plásmido ti desarmado). También es muy común que una vez obtenida la construcción genética dentro de un plásmido (en el cual se clona y se obtienen muchas copias para trabajar), luego se la extrae del mismo para sólo tener la secuencia con los genes de interés y de selección (incluidas las secuencias regulatorias) y así reducir el fragmento de ADN a transferir.
9.2.2 QUÍMICOS
MÉTODO DEL FOSFATO CÁLCICO.
Basado en la obtención de un precipitado entre el cloruro de calcio y el DNA en una solución salina de  fosfatos. En esta situación coprecipitan formando unos agregados que son endocitados/fagocitados por las células. Aparentemente el agregado con calcio protege al DNA de la degradación por las nucleasas celulares. El tamaño y la calidad del precipitado es crítico para el éxito del proceso, que se ve afectado por factores tales como pequeños cambios en el pH de la solución, etc
MÉTODO DE LIPOSOMAS.
Se basa en la formación de complejos entre lípidos catiónicos y DNA. El complejo tiene afinidad por la membrana y permite la entrada del DNA en el citosol. Una de las posibles vías es la incorporación de liposomas a la membrana y la entrada flip-flap. Existen un gran número de lípidos que se emplean en lipofección, aunque existe una estructura consenso de un lípido catiónico sintético, a partir de la cual se han diseñado muchas variantes (por ej. DOPE). Es esencial optimizar las condiciones específicas de transfección para obtener buenas eficiencias, que suelen ser en buenas condiciones de entre el 70 y el 90% de las células de la placa. Las desventajas del método son, aparte del elevado precio de los lípidos, el hecho de que no todos los lípidos funcionan en todos los tipos celulares, y que hay que optimizar el ensayo para cada tipo celular. Los parámetros a optimizar son la relación entre lípido y DNA (relación de cargas), la cantidad de DNA empleado, el tiempo que se exponen las células al complejo y la presencia o ausencia de suero.
BIBLIOGRAFIA

9.1.5 TRANSFECCION



La transfección consiste en la introducción de material genético externo en células eucariotas mediante plásmidos, vectores víricos (en este caso también se habla de transducción) u otras herramientas para la transferencia


Es el proceso de transferencia genética desde una célula donadora a otra receptora mediatizado por partículas de bacteriófagos que contienen ADN genómico de la primera.
En la transducción podemos distinguir dos estapas diferenciadas:

1. Formación de la partícula fágica transductora: un trozo de material genético de la célula donadora se introduce en el interior de la cabeza de la cápsida de un fago. Las partículas transductoras son en cierta manera “subproductos” anómalos del ciclo normal del fago.
2. La partícula transductora inyecta de forma habitual el ADN que porta a la célula receptora, donde este ADN puede eventualmente recombinarse y expresar su información.

L       la transducción descubierta por Lederberg y Zinder se llama transducción generalizada.


Mediante ella se puede transferir cualquier marcador del genóforo del donador, con aproximadamente la misma frecuencia relativa (de ahí el calificativo de generalizada).
La transducción generalizada se produce sólo como consecuencia de infecciones líticas.
       

El ADN del genomio de la bacteria donadora que es introducido en la partícula transductora suele ir sin acompañamiento de ADN del propio fago. Por ello, a esta peculiar partícula consistente en cápsida del fago que encierra sólo ADN genofórico de la bacteria se la denomina pseudovirión.

9.1.3 TRANSDUCCIÓN.






La transducción es la transferencia de genes de una bacteria a otra por medio de un virus
En la mayoría de los casos la transferencia genética se realiza entre miembros de las mismas especies bacterianas. Sin embargo, si un fago en particular posee un amplio rango de huéspedes que él es capaz de infectar, entonces la transferencia entre las especies puede ocurrir. La capacidad del fago para mediar la transducción, está relacionada con el ciclo de vida del mismo
La transducción es el mecanismo más frecuente de intercambio y recombinación genética en las bacterias. Hay dos tipos diferentes de transducción: la generalizada y la especializada.

Transducción generalizada

Ocurre durante el ciclo lítico (ciclo donde el fago rompe la bacteria) de los fagos y es capaz de transferir cualquier parte del genoma bacteriano. Durante la fase de ensamblaje viral, fragmentos del cromosoma bacteriano pueden quedar en la cápsida viral. Cuando este fago infecta a una nueva bacteria, el material puede ser transferido al cromosoma bacterial. La cantidad de DNA bacteriano trasportado depende principalmente del tamaño de la cápsida del virus.

Transducción especializada –

 La transducción especializada es la transducción en la cual solo ciertos genes del donador pueden ser transferidos al receptor. Diferentes fagos pueden transferir diferentes genes pero un fago individual solamente puede transferir unos pocos genes. La transducción especializada está mediada por fagos lisogénicos o fagos temperados y los genes que se llegan a transferir dependerán del lugar donde el profago queda insertado en el cromosoma.
Durante la escisión (separación) del profago, un error llega a ocurrir ocasionalmente en el cual un poco del DNA del huésped escinde(se separa del cromosoma) junto con el DNA del fago. Solo puede ser transferido el DNA del huésped que esté flanqueando cada lado del sitio donde el profago se ha insertado. Después de la replicación y la liberación del fago y a través de la infección de la célula receptora, puede ocurrir una lisogenización de la receptora dando como resultado la transferencia estable de los genes de la donadora. La receptora ahora tendrá dos copias de los genes que le fueron transferidos. También es posible que se lleve a cabo una recombinación legítima entre los genes de la donadora y de la receptora.
















9.1.2 CONJUGACIÓN


La conjugación es la transferencia de DNA de una donadora a una receptora, mediante contacto físico directo entre las células

tipos de células acopladas en las bacterias

a. Donadora –es consecuencia de la presencia en dicha célula de una pieza extra de DNA, llamada factor F, factor de fertilidad o factor sexual. El factor F es una pieza circular de DNA que es capaz replicar en forma autónoma en la célula. Las piezas de DNA extra-cromosomal que pueden replicar autónomamente, reciben el nombre genérico de plásmidos. El factor F posee los genes necesarios tanto para su replicación como para su habilidad de transferir DNA a la célula receptora. Una de las cosas que el  factor F codifica es la capacidad de producir una estructura llamada pilus sexual (pilus F) sobre la superficie de la bacteria. El factor F no es el único plásmido que puede mediar la  conjugación pero generalmente se toma como modelo.
b. Receptora – La capacidad de actuar como receptora es consecuencia de la carencia de esta célula del factor F.
Estados fisiológicos del factor F

a. (F+) Autónomo – El factor F en este estado lleva solamente aquellos genes necesarios para su replicación y para la transferencia de DNA. No hay genes cromosomales asociados con el factor F en las cepas F+.
En los cruces del tipo F+ X F- el F- se convierte en F+ mientras que F+ permanece como F+. Por lo tanto, el factor F es infeccioso. Por otra parte, solamente se presenta un bajo nivel de transferencia de los genes cromosomales de la donadora.
b. (Hfr) Integrado - En este estado el factor F se encuentra integrado en el cromosoma bacteriano, vía un evento de recombinación
En los cruces del tipo Hfr X F- el F- raramente se convierte en Hfr y la célula Hfr permanece como tal. En éste caso existe una alta frecuencia de transferencia de los genes cromosomales del donador
c. Autónomo con genes cromosomales (F') - En este estadio el factor F es autónomo, pero ahora contiene algunos genes cromosomales. Los factores F' se producen por escisión del factor F de una Hfr, Ocasionalmente, cuando el factor F se escinde del cromosoma Hfr, los genes del donador localizados en cada lado del factor F pueden escindir junto con el factor F generando una F'. Los factores F' se denominan dependiendo de los genes cromosomales que contienen.
En los cruces del tipo F' X F- el F- se convierte a F' mientras que F' permance como tal. Por otra parte esta bacteria presenta una alta frecuencia de transferencia de aquellos genes cromosomales se encuentran en el F' y presenta una baja frecuencia de transferencia de otros genes cromosomales del donador.

Mecanismo de la conjugación.

Cruces F+ X F- 
-Formación del par - La punta del pilus sexual se pone en contacto con la  receptora y formandose un puente de conjugación entre las dos células. Es a través de este puente que el DNA pasará del donador al receptor. De tal forma que el DNA queda protegido de las nucleasas ambientales. Los pares de acoplamiento o mating pairs pueden ser separados por fuerzas tan simples como la agitación y así la conjugación se puede interrumpir. Consecuentemente, los pares de apareamiento permanecen asociados solamente por un tiempo corto.
-Transferencia del DNA – El DNA del plásmido se corta en un sitio específico llamado origen de la transferencia y se replica mediante un mecanismo de círculo rodante. Una sola cadena de DNA pasa a través del puente de conjugación y entra a la receptora donde la segunda cadena se replica.
Este proceso explica los cruces característicos F+ X F-. La receptora se convierte en F+, la donadora permanece como F+ y presenta una baja frecuencia de transferencia de los  genes cromosomales del donador, realmente no hay transferencia de los genes cromosomales del donador. Sin embargo en la práctica, existe un bajo nivel de transferencia de los genes cromosomales del donador en tales cruces.

Cruces F' X F-
-Formación del Par
- Transferencia del DNA - Este proceso es similar al cruce F+ X F-. Sin embargo, debido a que el F' lleva algunos genes cromosomales estos también van a ser transferidos.
- Recombinación homóloga. No es necesaria aunque puede ocurrir.
Este mecanismo explica las características de los cruces F' X F-. El F- se convierte en F', el F' permanece como tal y la se presenta una alta frecuencia de transferencia de los genes del donador que van en el F' pero una baja frecuencia de transferencia de otros genes cromosomales del donador.
Importancia – Entre las bacterias Gram negativas esta es la forma principal en que se transfieren los genes. La transferencia puede ocurrir entre diferentes especies bacterianas. La transferencia de resistencia múltiple a los antibióticos por conjugación ha llegado a ser un problema relevante en el tratamiento de ciertas enfermedades bacterianas. Debido a que la célula receptora se convierte en donadora después de la transferencia del plásmido, es fácil ver por qué un gen de resistencia a los antibióticos que va en un plásmido puede rápidamente convertir una población sensible de bacterias en una resistente.
Las bacterias Gram positivas también tienen plásmidos que llevan genes de resistencia múltiple a los antibióticos, El mecanismo de conjugación en las bacterias Gram + es diferente al de las Gram -. En las bacterias Gram + el donador produce un material adhesivo el cual causa agregación con el receptor y el DNA se transfiere.